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      芍藥最佳采收期研究

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      點擊次數:6337 更新時間:2015年12月08日13:52:11 打印此頁 關閉

      本研究對芍藥根中淀粉酶活性以及可溶性糖含量的動態變化進行考察, 結合芍藥苷含量變化規律 , 為確定最佳采收期提供依據。

      1 材料與試藥11 材料 江蘇省南京市溧水縣柘塘鎮新鮮三年生芍藥, 經周立良副教授鑒定為毛茛科植物芍藥 P 1acti f l or a 。除去表面泥土, 每份樣品各自切碎后混合均 勻 。12 儀器與試劑LC 10A 高效液相色譜儀; SPD 10A 紫外一 可見光檢測器 ; R 6A 數據處理機 (均為日本島津公司) 。紫外一 可見分光光度計 756CR T (上海精密科技儀器公司); TDZ5 多管架自動平衡離心機(長沙湘儀離心機儀器有限公司)。芍藥苷對照品 (中國藥品生物制品檢定所 , 批號 0736-2000 14 )。麥芽糖為分析純(上?;叟d生化試劑公司, 批號 2004041 1 , 純度 > 1 985)。蔗糖為分析純 (汕頭西隴化工廠, 批 號 0411122 , 純 度 ≥999)??扇苄缘頌榉治黾?span style="color: rgb(0, 0, 0); font-family: Calibri; font-size: 18px;">(上海實億化試公司 , 批號 20040 128 )。水為自制超純水 , 甲醇分析純 (上海九億化試公司) , 甲醇色譜 純(淮陰漢邦), 其余試劑均為分析純。

      2 方法與結果21 淀粉酶活性211 反應用試劑的制備 DNS 的制備: 精確稱 取 50 g 3 , 5. 二硝基水楊酸 , 溶于200 m L 2 m o] · L 氫氧化鈉溶液中, 作為溶液 1。稱取 130 g酒石酸鉀鈉 , 用蒸餾水定容至 500 m L , 作為溶液 2。合并溶液 1 和溶液 2 , 加入 5 g 苯酚和5 g 亞硫酸鈉 , 加水 定容至 1 L , 暗處保存備用。 麥芽糖標準溶液的制備: 精確稱取 10 g 麥芽 糖, 加水溶解, 定容至 100 m L 后, 置于冰箱中4 a I =保 存 1 周 , 若出現絮狀棄之重配 J。 淀粉溶液的制備: 精密稱取 10 g 淀粉, 置于燒杯 中搖勻, 緩慢加熱至透明后, 加水定容至 100 m L 備用。212 標準曲線的制備分別取 1 m g · m L 麥芽 糖標準溶液 02 , 04 , 06 , 08 , 10 m L , 加蒸餾水至2 m L , 再分別加入 DN S 溶液 2 m L , 各管混勻 , 置于沸水浴中 5 m in , 冷卻后加入蒸餾水定容至 25 m L , 以蒸餾水為空白對照 , 測定波長 520 nm 處 的吸光值。麥芽糖標準品質量在 02 10 m g 呈線性關系。將 5 次結果進行回歸分析 , 回歸方程 Y = 0573 5X + O000 5 , 相關系數  = 0993 5 。213 淀粉酶液的提取新鮮芍藥根 25 g, 洗 凈, 切碎混勻, 加入少量蒸餾水和石英砂 , 在冰浴中研磨至漿狀后 , 轉入離心管 , 3 000 r ·m in 條件下 離心 30 m i n 。取上清液過濾 , 濾 液定容至 100 m L , 作為酶提取液備用。214 Ot, 口 一 淀粉酶的總活性測定取酶提取液 1 m L , 加入 1 m L pH 56 檸檬酸緩沖溶液和 2 m L 1% 淀粉水溶液, 混勻。4O a I =水浴 15 mi n 后 , 再加入 2 m L 預熱的1%淀粉溶液。4o a I =水浴 5 mi n, 迅速加人 04 m o] · L 氫氧化鈉溶液終止反應 , 作為待測液備用。取 1 m L 上述待測液 , 加入 1 m L 蒸餾水和2 mL DNS 溶液, 混勻, 置于沸水浴中5 m i n, 冷卻后加入蒸餾水定容至 50 m L 。以蒸餾水為空白對照 , 測定波長520 nm 處的吸光值 。 以 4o a I =時 , pH 56 條件下 , 每分鐘水解淀粉生 成 1 m g 麥芽糖所需的淀粉酶量作為 1 個酶 活性單 位 。 重復測定 3 次 , 結果見表 1。 表 1 不同采集期芍藥根中淀粉酶活性m g ·g 一 ·m l 。 n 215  Ot. 淀粉酶的活性測定  取酶提取液 1 m L ,7O a I =水浴 15 mi n 滅活 . 淀粉酶, 迅速冷卻后, 其余操作同214 項下。 . 淀粉酶總活性 = O t, J B- 淀粉酶總活性 一Ot . 淀粉酶活性。2 2 可溶性糖含量測定221 蔗糖標準溶液制備精確稱取 10 g 蔗糖, 少量水溶解 , 加 入 05 m L 濃硫酸 , 蒸餾水定容 至100 m L 。吸取上述 蔗糖對照品溶液 1 m L 加入 100 m L 量瓶中, 加水定容至刻度 。2 2 2 標準曲線的制備分別取 100 X 10 g · L 的蔗糖標準溶液 02 , 04 , 06 , 08 , 10 m L , 加 入蒸餾水至 2 m L 。再按順序分別加入 9%苯酚溶液1 m L , 搖勻 , 從管液正面以 5 20 s 緩慢加 入 5 m L濃硫酸, 搖勻。室溫下放置 30 mi n, 冷卻后在波長485 nm 處 比色測吸光度。蔗糖對照品質 量在 20 X 1O ~~100 X 10 g 呈 線性關 系?;貧w方 程 Y = 0 00 9 1X + O 07 8 0 , R = O 999 2 。223 可溶性糖的提取準確稱取新鮮芍藥根約01 g, 磨碎。轉入試管中 , 加蒸餾水 10 m L , 于沸水浴中提取 2 次, 每次 30 mi n。提取液過濾合并, 定容 至 50 m L 量瓶中 , 做樣品液備用 。22 4 可溶性糖的顯色及測定 吸取 05 m L 樣品液于試管中 , 加蒸餾水 15 m L , 按順序加入 1 m L 苯 酚, 5 m L 濃硫酸 , 搖勻 。室溫下放置 30 m in , 在波長485 nm 比色測吸光度。結果見表 2。23 芍藥苷含量測定·  不同采集期芍藥根中芍藥苷 , 可溶性糖質量分數  %231 色譜條件 Shim adzu V P OD S C 8(46 m m × 250 m m , 5 m ) , 柱前加裝 C 。 保護柱 ; 流動相甲醇一 水 (2575 ) ; 流速 10 m L ·m in ~; 檢測波長230 nm ; 靈敏度 001 A U FS ; 柱溫為室溫 , 使芍藥苷的出峰時間為 25 30 m i n 。在上述色譜條件下樣品中芍藥苷與其他組分分離效果較好。232 供試品制備取新鮮芍藥根 , 分離栓皮后稱取 15 g , 適當粉碎 , 加適量甲醇浸漬 48 h , 浸漬液過濾 , 殘渣加入以適量甲醇 , 加熱提取 30 m in, 提取液過濾 , 合并 2 次浸提液 , 定容至 25 m L。取定容后提取液 05 m L , 稀釋至 10 m L , 045 m 微孔濾膜過濾后, 作為待側樣品溶液。進樣量 8 L, 每個月共測定 10 份, 取平均值 。

      3 討論 淀粉酶廣泛存在于各種植物 , 分為和 2 種催化亞型。  淀粉酶不耐酸, 在 pH 36 以下迅速鈍化; 淀粉酶不耐熱 , 在 70 ℃下, 15 m in 被鈍化。故本實驗采用李雯所報道的改進方法測定淀粉酶活性。 本研究顯示芍藥根中淀粉酶活性及其分解產物可溶解性糖的變化與芍藥生長的生理周 期十分吻合, 6 月至9 月葉片、 莖段仍能進行光合作用提供能 量; 但高溫不利于糖分的積累 J。所以該時期可溶性糖含量并不高。隨地上部分逐漸枯萎, 可溶性糖含量緩慢上升。10 月 ,11 月 , 此時地上部分已枯萎 , 溫度降低, 對于根部的養分供應暫停, 淀粉酶活性與可溶性糖含量迅速增高 , 以抵御低溫可能帶來的脅 迫以及保證新根的生長。故此時含量達到實驗期內的最大。12 月、 1 月, 芍藥已完全進入休眠期, 部分· 954 ·糖分被新根生長所消耗 , 故此時根中可溶性糖含量和淀粉酶活性均開始降低。 淀粉酶只有在種子萌發和出苗時期比較活躍。但芍藥根中 7 月和 ll 12 月份 淀粉酶活性有升高 , 與報道芍藥出苗期間的活性水平相似 , 顯示芍藥根內可能有不同的生理機制啟動 , 因此這一時期不適宜作為芍藥的采收期。具體原因有待進一步實驗考察 。 芍藥苷含量總體變化不大 , 分別在 7 月和 12 月初出現 2 個高值。其他文獻報道芍藥苷5 月份初花期出現最大值。

      從芍藥生理周期來看 , 芍藥苷含量似與芍藥根的干物質積累成反比。 傳統認為芍藥一般在栽植 3 4 年后采收 , 收獲期多為 8 9 月 。本實驗中 ,芍藥苷在 7 12 月出現高值,但此時淀粉酶活性有升高,不適宜采收。而 10 月可溶性糖含量出現突然增大 , l1月底 ~12 月初到達最高 , 此時采收芍藥中淀粉大量轉化 , 粉性不足 , 且水煮過程中可溶性糖損失過大會導致得率降低。因此芍藥采收不宜晚于 10 月。而此時期內芍藥苷含量卻呈現輕微下降趨勢。綜合上述變化 , 建議芍藥的收獲期在其自然倒苗后 9 月 中 旬至 10 月上旬為宜 。

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